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為什么很多研究人員更喜歡用多克隆抗體進行IHC/IF實驗?
發表者:北京博奧森生物      發表時間:2020-2-27



       單克隆抗體和多克隆抗體都廣泛應用于IHC/IF檢測。然而,與多克隆抗體相比,某個單克隆抗體的使用效果,在不同的樣品中可能存在顯著的差異。揭示這種表象背后的原因,將是一件很有趣的事情。




       我們都知道,在IHC/IF樣品制備的過程中,生物樣本的抗原性將面臨巨大的挑戰,尤其是石蠟包埋樣品?;瘜W試劑以及不良的物理條件可以很容易地破壞或阻斷目標蛋白(抗原)中的某些抗原表位。一旦某個特定的抗原決定簇在IHC/IF樣品制備過程中被破壞,其專一性的單克隆抗體將失去檢測到這個抗原的機會,從而造成假陰性的結果。相比之下,多克隆抗體能夠在同一抗原上識別多個表位,即使在某一表位特性喪失的情況下,目標蛋白上的其它抗原表位仍然可能被抗體識別,從而表現出完美的實驗結果。此外,高質量的多克隆抗體由多種抗體分子組成,它們分別識別抗原上的一系列抗原表位。當進行IHC/IF檢測時,每個抗原分子可以結合多個不同的抗體分子,在檢測結果中顯示出很強的信號,從而極大的提高抗原檢測的靈敏度。

此外,自然界中的許多蛋白質,由于表達過程中存在的剪切差異,有不同的變形體存在。如果某個蛋白表位并不是均一性的存在于所有變形體中,其特異性單克隆抗體就無法識別所有的蛋白變形體。這一限制將直接影響對于該蛋白質家族的功能及作用的整體研究。顯而易見,多克隆抗體具有識別多個抗原表位的特性,在IHC/IF試驗中,受到這種限制的影響較小,其抗原檢測的表現就會更好,體現出優良的抗原檢測靈敏度。

      綜上所述,鑒于多克隆抗體整體上具有較高的抗原識別靈敏度,經驗豐富的科學家們在IHC/IF檢測中更喜歡使用多克隆抗體,而非單克隆抗體。

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       盡管有前面的討論,許多優質的單克隆抗體在IHC/IF應用中依然有良好的表現。因此,當你在決定使用單克隆抗體還是多克隆抗體時,必須考慮具體的實驗條件和目的。下面我們就來總結一下每種抗體的優缺點。





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