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免疫組化問題解答
1、染色過強?
  • 原 因
  • 解決方法
  • 抗體濃度過高或孵育時間過長
  • 降低抗體滴度、抗體孵育時間:室溫1小時或4度過夜
  • 孵育溫度過高超過37度
  • 一般在室溫20-28度
  • DAB顯色時間過長或濃度過高
  • 顯色時間不超過5-12分鐘,以顯微鏡下觀察為準
2、非特異性背景染色?
  • 原 因
  • 解決方法
  • 操作過程中沖洗不充分
  • 每步沖洗3次每次5分鐘
  • 組織中含過氧化物酶未阻斷
  • 可再配置新鮮3%H2O2封閉孵育時間延長
  • 組織中含內原性生物素
  • 正常非免疫動物血清再封閉
  • 血清蛋白封閉不充分
  • 血清蛋白封閉不充分
3、染色弱?
  • 原 因
  • 解決方法
  • 抗體濃度過低、孵育時間過短
  • 提高抗體濃度、孵育時間不能少于60分鐘
  • 試劑超過有效使用時間
  • 應更換試劑
  • 操作中添加試劑時緩沖液未瀝干
  • 每步滴加試劑前瀝干切片中多余的緩沖液
    使試劑稀釋 (應防止切片干燥)
  • 室溫太低,低于15度
  • 要改放在37度孵育箱孵育30-60分鐘或4度冰箱過夜
  • 蛋白封閉過度
  • 封閉不要超過12分鐘
4、染色陰性?
  • 原 因
  • 解決方法
  • 操作步驟錯誤
  • 應重試,設陽性對照
  • 組織中無抗原
  • 設陽性對照以驗證試驗結果
  • 一抗與二抗種屬連接錯誤
  • 仔細確定一抗二抗種屬無誤
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